熒光分光光度計測量量子產率
發(fā)布時間:
2023-02-15 13:51
熒光量子產率光譜校正方法
由于受到激發(fā)光源、單色器和光電接收器的光譜特征的影響,不同熒光分光光度計記錄的熒光光譜并不相同。這樣的光譜稱為實驗光譜或者未經校正的激發(fā)光譜,不能用來計算物質的熒光量子產率,所以需要對這些光譜進行校正。
注:儀器出廠之前存有校正光譜,用戶可根據需求重新校正。
1、激發(fā)光譜的測量和校正
校正熒光分光光度計激發(fā)光譜時,將羅丹明B標準溶液放進樣品室內的樣品架上。由于羅丹明B標準溶液在200-600nm波長范圍內的激發(fā)光譜應為一水平直線,所以可以用來校正熒光分光光度計200-600nm波長范圍內的激發(fā)光譜特征。
1.1、操作步驟
(1)將羅丹明B標準溶液放進樣品室標準樣品架
(2)打開設置點擊光譜校正按鈕進入光譜校正界面
(2)選取激發(fā)(200-600nm)選項,點擊測量,系統(tǒng)會自動更新現(xiàn)有圖譜。
2、發(fā)射光譜的測量和校正
校正發(fā)射光譜時,分兩種情況:
(1)不使用積分球測量量子效率時:
在樣品架處放置一個散射附件,通過熒光分光光度計激發(fā)單色器和發(fā)射單色器同步掃描可以獲得激發(fā)和發(fā)射兩方疊加作用的光譜特征。將這個光譜特征曲線除以先前得到的激發(fā)光譜特征曲線,即可得到儀器200-600nm波長范圍內的發(fā)射光譜特征。
(2)使用積分球測量量子效率時:
將熒光分光光度計樣品架拆下,裝上積分球。詳見積熒光量子產率附件的安裝介紹。通過激發(fā)單色器和發(fā)射單色器同步掃描可以獲得激發(fā)和發(fā)射兩方疊加作用的光譜特征。將這個光譜特征曲線除以先前得到的激發(fā)光譜特征曲線,即可得到儀器200-600nm波長范圍內的發(fā)射光譜特征。
2.1、操作步驟
(1)將積分球或者散射附件裝入樣品室。
(2)選取光譜校正界面發(fā)射(200-600nm)選項,點擊測量,系統(tǒng)會自動更新現(xiàn)有圖譜。
3、發(fā)射光譜長波區(qū)域內的測量和校正
對于發(fā)射光譜而言,為了對600nm以上波長區(qū)域進行光譜校正,則需要將一個已知光譜特征的標準光源照射到發(fā)射單色器中,從而求出發(fā)射光譜長波區(qū)域內的光譜特征。選擇1601272標準光源可以校正波長為500-900nm范圍內的光譜。加上短波長羅丹明B的校正方法,可以校正涵蓋200-900nm的波長范圍。
3.1、校正所需附件及安裝
(1)標準光源及電源
1601272標準光源采用穩(wěn)定的直流恒流源供電,所以需要配合使用精密直流穩(wěn)流電源。
3.2、電源及標準光源使用說明
(1)電源打開后預熱30分鐘以上。
(2)按下DISPLAY SETTING按鍵,點亮指示燈后,設置電壓為8V,電流為1600mA,確認設定值后按下OUTPUT按鍵,輸出指示燈點亮,此時電壓窗口顯示值應小于8V,電流窗口顯示1600mA,穩(wěn)流(CC)指示燈亮起,穩(wěn)壓(CV)指示燈滅,表明儀器進入穩(wěn)流狀態(tài)。
(3)標準光源點亮十分鐘后開始定標校正。
注意:標準光源點亮時不能受到震動,因為燈絲發(fā)熱時比較脆弱易變形。
(4)定標完成后,按一下復位鍵再斷開光源兩端導線,然后關閉電源。
3.3、操作步驟
(1)打開熒光分光光度計軟件設置點擊光譜校正按鈕進入光譜校正界面
(2)選取光譜校正界面發(fā)射(500-900nm)選項,點擊測量,系統(tǒng)會自動更新現(xiàn)有圖譜。
4、光譜校正取消的方法
點擊光譜校正界面恢復默認按鈕即可。